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Résumé : 26 souches d'actinomycètes ont été isolées à partir d'échantillons de sol et d'écorces d'arbres prélevés d'écosystèmes différents (sol de champ à Sousse, sol de sable avec végétation et sol de dune à Douz). Leur identification a été réalisée en se basant sur leurs caractères macroscopiques et microscopiques. L'activité antimicrobienne a été effectuée contre deux bactéries à Gram positives et trois bactéries à Gram négatives. Elle a été réalisée par trois techniques qui se basent sur le principe de diffusion qui sont la technique du cylindre d'agar, la technique des disques et la technique des puits. Parmi les 26 souches isolées, 21 souches (80.64%) ont montré une activité contre au moins une bactérie-test étudiée dont 38% ont présenté un fort effet antibactérien. Ces derniers ont comme cible majoritaire les bactéries à Gram positives.